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心臟組織單細(xì)胞解離酶MJ001專為人、小鼠、大鼠等動物心臟組織單細(xì)胞懸液制備設(shè)計，通過多元復(fù)合酶的溫和酶解作用將心臟組織高效解離成為單個細(xì)胞懸液，在高得率的同時能夠獲得高活性的單細(xì)胞，后續(xù)適用于單細(xì)胞測序、流式細(xì)胞分析、流式細(xì)胞分選、原代細(xì)胞培養(yǎng)、類qi官3D培養(yǎng)等實驗。優(yōu)勢特點：1、一步即用型本產(chǎn)品只需把配套的酶干粉溶解在溶解液里，一步操作即可進(jìn)行后續(xù)實驗。無需像進(jìn)口競品一樣，把三四種酶分別溶解在不同溶液里，再分別進(jìn)行體積計算，后量取不同體積的酶混合在一起并混勻才能使用，本產(chǎn)品無需任何稱量、計算，避免多步驟操作和復(fù)雜的計算，減少出錯概率。2、多元復(fù)合酶本產(chǎn)品是自主研發(fā)生產(chǎn)的多元復(fù)合酶，根據(jù)不同組織的細(xì)胞間質(zhì)種類配備8種以上的復(fù)合酶，可以更好的消化解離細(xì)胞間的各種組織基質(zhì)，比單純使用進(jìn)口膠原酶IV、DNA酶或進(jìn)口競品的三四種混合酶的解離效率更高，解離時間短、細(xì)胞得率高、細(xì)胞活性強(qiáng)、抗原表位完整，自研自產(chǎn)成本更低，更有競爭力。3、解離時間短由于本產(chǎn)品使用的是8種以上自研自產(chǎn)的特異性組織解離酶，大多數(shù)qi官組織在10-15分鐘即可解離完全，解離時間超短，而單純使用進(jìn)口膠原酶IV、DNA酶或進(jìn)口競品的三四種混合酶需要1小時左右，甚至需要2-3小時才能解離完全。4、細(xì)胞得率高建立在多元復(fù)合酶的基礎(chǔ)上，該產(chǎn)品可以更好的消化細(xì)胞間的各種組織基質(zhì)，組織消化更徹底，組織單細(xì)胞完全釋放出來，組織團(tuán)塊殘留少，因此細(xì)胞得率更高。5、細(xì)胞活性強(qiáng)針對不同的組織該產(chǎn)品配套了不同的特異性解離復(fù)合酶，該復(fù)合酶是溫和的解離方式，不像胰酶一樣對細(xì)胞有較大損傷，并且該復(fù)合酶酶解消化時間更短，大幅減少了細(xì)胞的離體時間，防止了解離酶的過度消化，因此能得到更高活率的單細(xì)胞。抗原表位更完整的細(xì)胞。6、抗原表位完整由于該產(chǎn)品酶解效率更高，酶解時間和細(xì)胞離體時間更短，組織細(xì)胞損傷更低，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性更好，細(xì)胞活性更強(qiáng)，因此抗原表位更完整，更有利于抗體結(jié)合染色，解離的單細(xì)胞更適合進(jìn)行流式分析分選實驗。使用方法1、溶解酶干粉首次啟用試劑盒時執(zhí)行該操作步驟。將A瓶中的酶干粉用力甩至瓶底；然后用移液槍取B瓶中的溶解液反復(fù)吹打A瓶中的酶干粉并轉(zhuǎn)移至B瓶中，必要時可將槍頭口用剪刀剪大，確保A瓶中酶干粉全部轉(zhuǎn)移至B瓶中；隨后蓋緊B瓶瓶蓋上下顛倒B瓶直至酶干粉完全溶解，必要時可放置搖床上搖晃至完全溶解，完全溶解的酶溶液呈現(xiàn)清澈微棕色。2、過濾分裝解離酶在A瓶中酶干粉完全溶解在B瓶溶解液后，根據(jù)后續(xù)實驗如需要無菌解離組織，則需用注射器和0.22μm無菌過濾器過濾除菌后分裝。建議每5mL分裝一瓶，分裝至A瓶中，分裝后應(yīng)立即凍存在-20℃或-80℃冰箱中，可保存6個月。單次未使用完可凍存后下次繼續(xù)使用，但反復(fù)凍融不要超過三次，每凍融一次酶活會降低一部分，酶活降低時可增加酶的使用量以增強(qiáng)酶解效果。3、酶解實驗操作(1)實驗準(zhǔn)備：預(yù)制碎冰，冰上解凍單細(xì)胞解離酶和酶解終止液，單細(xì)胞解離儀器開機(jī)預(yù)熱，PBS預(yù)冷，眼科剪、鑷子等無菌手術(shù)器械，40μm無菌細(xì)胞篩，離心管、離心機(jī)等預(yù)冷。(2)組織收集：無菌條件下收集組織，立即置于冷的PBS中，盡可能4h內(nèi)處理，如需放置更長時間，請使用高活性組織保存液（貨號MJ104）。(3)清洗組織：將組織用冷PBS洗1-2次以去除血液、壞死組織等雜質(zhì)，稱重記錄。(4)剪碎組織：將清洗過的組織轉(zhuǎn)移至解離管中，用鋒利眼科剪碎成1-2mm3小塊，剪至泥糊狀，剪得越碎酶解就越充分，單細(xì)胞酶解時間就會越短；如有配備組織單細(xì)胞解離儀，覺得剪碎較麻煩也可不用嚴(yán)格剪碎，同樣能獲得較好的解離效果。(5)酶解組織：組織剪碎后，取適量單細(xì)胞解離酶加入解離管中，上下顛倒解離管使解離酶與組織充分混勻。(6)單細(xì)胞過濾：待組織完全解離后，立即瞬離解離管3s，并將解離管插在冰上，用移液槍吸取上清通過40μm的濾網(wǎng)進(jìn)行過濾，過濾全程在冰上操作。(7)終止酶解：取等量的酶解終止液（貨號MJ102）或完全培養(yǎng)基進(jìn)行終止酶解。(8)收集細(xì)胞：4℃、400g離心5分鐘后棄上清，用預(yù)冷的PBS清洗后再離心棄上清。(9)紅細(xì)胞裂解：取適量紅細(xì)胞裂解液（貨號MJ103）重懸細(xì)胞沉淀，冰上孵育10分鐘，間歇吹打輕搖，4℃、300g離心5分鐘后棄上清。(10)清洗：取預(yù)冷的PBS重懸，4℃、300g離心5分鐘后棄上清，重復(fù)清洗2次(11)去除碎片：如碎片較多，可用高效碎片去除劑（貨號MJ101）去除碎片。(12)細(xì)胞活性檢測：臺盼藍(lán)或AOPI染色，活細(xì)胞率應(yīng)＞85%。實驗注意事項：本產(chǎn)品單供科研使用；如下游實驗需無菌培養(yǎng)，全程需在超凈臺內(nèi)進(jìn)行無菌操作，避免污染；酶解需在37℃，其他操作均在冰上操作，嚴(yán)格控制溫度；根據(jù)組織酶解量調(diào)整酶解時間，勤觀察及時確認(rèn)裂解階段，在保證裂解效果情況下盡可能減少酶解時間，以免時間過長造成對細(xì)胞的損傷；若用于單細(xì)胞測序等要求較高的單細(xì)胞制備，全程需加快速度，單細(xì)胞解離后需立即進(jìn)入下游建庫步驟；該酶溶解后-20℃或-80℃保存，可保存6個月，單次未使用完可凍存后下次繼續(xù)使用，但反復(fù)凍融不要超過三次，每凍融一次酶活會降低一部分，酶活降低時可增加酶的使用量以增強(qiáng)酶解效果。

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